<생물학실험>

단백질의 검정 (닌히드린반응)

☞ 단백질을 구성하는 아미노산의 화학반응을 이용하여 단백질을 검정하는 방법이 여러 가지 개발되어 있지만, 본 실험에서는 닌히드린 반응(ninhydrin reaction)을 이용한다. 닌히드린 반응은 아미노기를 가진 유기물의 검출에 흔히 사용되는 방법이다. 닌히드린은 강력한 산화제로 아미노산을 산화하여 암모니아와 이산화탄소를 유리시키고, 알데히드(aldehyde)를 생성하며 자신은 환원된다. 유리된 암모니아는 환원된 닌히드린 및 잔류 닌히드린과 반응하여 자색(violet)의 발색반응을 한다. 닌히드린 반응은 아미노기를 가진 유기물질, 즉 단백질, 펩티드, 아미노산에 대해서 양성반응을 나타내며 또 암모니아에서도 양성반응을 나타낸다.

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◉  닌히드린 반응을 이용한 단백질의 검정  ◉

실험 기구 및 재료

1% 글리신용액, 1% 설탕용액, 1% 녹말용액, Dropout(DO) 용액, 암모니아수,

우유, 증류수, 0.1% 닌히드린용액, 시험관, 시험관대, Hotplate, 비이커 등

실험 방법

① 7개의 시험관에 1% 글리신용액, 1% 설탕용액, 1% 녹말용액, DO용액, 암모니아수, 우유, 증류수를 각각 3mL 씩 넣는다.

② 0.1% 닌히드린 용액을 7개의 시험관에 1mL 씩 첨가한다.

③ 동일한 시간 (약 3분) 그냥 상온에서 방치한 대조군과 끓는 물에 넣어 중탕시킨 후 식힌 실험군을 비교하여 그 결과를 관찰, 논의한다.

실험 결과

시료용액	색깔		결론
	상온	중탕
글리신 용액
설탕 용액
녹말 용액
DO 용액
암모니아수
우유
증류수

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[참고1] 0.1% 닌히드린 용액 : 닌히드린 (ninhydrin, 백색분말) 0.1g을 99% 에탄올 (또는 n-Butanol) 100 mL에 녹인 용액으로, 햇빛에 약하여 갈색병과 호일로 감싸서 보관하는 것이 좋다~!!

[참고2] Dropout 용액 (DO,10X) : 아미노산 9가지의 혼합물 (효모 배지 제조용)

구성성분	양
L-Isoleucine	300 mg/L
L-Valine	1500mg/L
L-Adenine hemisulfate salt	200 mg/L
L-Arginine HCl	200 mg/L
L-Lysine HCl	300 mg/L
L-Methionine	200 mg/L
L-Phenylalanine	500 mg/L
L-Threonine	2000mg/L
L-Tyrosine	300 mg/L

[참고3] 닌히드린 반응은 감도가 매우 높은 편으로 범죄 수사에 적용하여 지문을 찾는데 이용하기도 한다. 사람의 땀에는 소량의 단백질이나, 피부에서 떨어진 단백질 조각들이 있다. 사람의 지문의 융기부분에 묻은 땀은 손이 닿은 부분에 지문의 융기 모양대로 땀의 자국을 남기게 된다. 여기에 닌히드린 반응을 시켜보면 땀에 있는 아미노산이 반응하여 보라색을 나타내고 지문의 흔적이 드러나게 된다. 닌히드린 반응은 매우 예민하기 때문에 아미노산 및 단백질의 확인에 보편적으로 쓰일 뿐 아니라 아미노산의 정량에도 이용된다. <끝>